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基于重组腺相关病毒载体的HSV-2gD表位疫苗构建及小鼠免疫保护作用研究
荆明箴;占雨欣;钟歌唱;王旭颖;陈小宇;佘应龙;目的 本研究旨在开发基于重组腺相关病毒（Recombinant adeno-associated virus, rAAV）载体的Ⅱ型单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus type 2, HSV-2）gD表位疫苗。HSV-2感染导致生殖器疱疹，并终生潜伏于背根神经节，在机体免疫水平低下时复发，且目前尚无根治方法，是全球最严重的性传播疾病之一。目前尚无相关疫苗获批，现有治疗药物存在抗药性和毒副作用，因此，亟需开发有效预防HSV-2感染和传播的疫苗。方法 本研究通过抗原表位预测软件筛选HSV-2包膜蛋白gD的两个片段，通过基因重组及病毒包装构建了两个重组腺相关病毒rAAV-sn-9和rAAV-sn-10。在感染细胞系及小鼠后，均可分泌表达相应蛋白。以之作为病毒载体疫苗，在BALB/c小鼠HSV-2感染模型中评价其免疫保护效果。结果 rAAV载体疫苗在BALB/c小鼠模型中安全耐受，可有效诱导特异性体液免疫和细胞免疫。HSV-2攻毒试验进一步表明，rAAV载体疫苗可减缓感染小鼠体重下降、降低死亡率，并显著降低生殖道和背根神经节病毒载量。结论 本研究构建的rAAV载体疫苗对小鼠HSV-2感染具有免疫保护作用，为新型HSV-2疫苗开发提供了新的思路。
利用CRISPR/Cas9系统构建IFITM3敲除细胞系
邢云飞;李士文;李泽辉;王菲菲;魏佳乐;胡慧;靳晓慧;目的 本试验采用CRISPR/Cas9基因编辑技术，成功构建干扰素诱导跨膜蛋白3(Interferon-induced transmembrane protein 3, IFITM3)基因敲除的LLC-PK1-IFITM3KO。以LLC-PK1-IFITM3KO细胞系为核心工具，系统探究IFITM3基因对猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)感染宿主细胞及后续传播过程的调控作用，旨在为深入开展IFITM3基因的生物学功能研究，以及阐明其调控PDCoV感染与传播的分子机制提供坚实的理论依据与实验基础。方法 根据NCBI数据库中猪IFITM3基因序列，设计3条单链向导RNA(Single guide RNA,sgRNA)，构建重组慢病毒载体并包装成慢病毒，用以转导LLC-PK1细胞。经嘌呤霉素抗性筛选后，通过有限稀释法获得单克隆细胞系。采用DNA测序验证基因敲除情况，Western blotting检测IFITM3蛋白表达；利用RT-qPCR和Western blotting检测IFITM3基因敲除后PDCoV S基因拷贝数及N蛋白表达变化，分析病毒复制以及吸附和内化水平。结果 重组慢病毒载体测序验证构建成功，筛选获得IFITM3基因敲除的LLC-PK1单克隆细胞系(LLC-PK1-IFITM3KO)，测序显示细胞存在2个碱基缺失，Western blotting证实无IFITM3蛋白表达。以野生型LLC-PK1细胞为对照，针对LLC-PK1-IFITM3KO细胞系的PDCoV感染特性检测结果显示：在病毒复制阶段，PDCoV的S基因拷贝数显著升高(P<0.01)，同时其N蛋白表达水平亦显著上调，上述结果明确提示IFITM3基因敲除可增强PDCoV的复制能力；而在病毒吸附与入侵阶段，LLC-PK1-IFITM3KO细胞系中PDCoV的S基因拷贝数则呈显著下降趋势(P<0.01)，表明IFITM3基因缺失会显著削弱PDCoV对宿主细胞的吸附及入侵能力。结论 本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了LLC-PK1-IFITM3KO细胞系，功能验证结果表明，IFITM3基因的敲除虽可显著抑制PDCoV对宿主细胞的吸附与入侵进程，却能明显促进该病毒在胞内的复制效率。LLC-PK1-IFITM3KO细胞系的成功建立，不仅为深入阐释IFITM3基因的生物学功能奠定了关键工具基础，更为后续解析IFITM3调控PDCoV感染的分子机制提供了核心细胞模型。
安第斯病毒研究进展
贺安文;景志忠;何小兵;翟军军;张艳;安第斯病毒（Andes virus, ANDV）是一种具有高度致病性和人际间传播能力的单股负链RNA病毒，人感染ANDV后可导致汉坦病毒肺综合征（HPS），病死率极高。目前，尚无有效疫苗或特异性抗病毒药物可用于ANDV的预防和治疗，使其成为重要的潜在公共卫生威胁。尽管尚未在我国发现本地感染病例，但在全球人员流动加剧背景下，ANDV存在输入性风险。本文对ANDV的病原生物学、流行病学、临床症状与病理变化、预防与治疗等方面的最新研究进展进行系统介绍，为进一步设计有效疫苗、开发治疗药物奠定基础。
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2024年贵州省儿童流感样病例中人腺病毒流行特征分析及其分子分型研究
吴萍;庄丽;郑菊;柯倩;目的了解贵州省2024年儿童流感样病例中人腺病毒的流行病学规律及分子分型特征。方法收集贵州省2024年儿童流感样病例咽拭子5998份，利用多重荧光定量PCR方法检测人腺病毒(Human adenovirus,HAdV)，采用SPSS 22对检测数据进行χ2检验分析；筛选合格HAdV阳性样本进行Hexon/Penton base/Fiber基因测序，采用MEGA等软件进行基因分型分析。结果共检出HAdV阳性样本455份，检出率为7.59%,HAdV不同性别检出率差异无统计学意义(P=0.634)；不同年龄、不同季节检出率P≤0.001，差异有统计学意义；其中3～6岁组的检出率最高为11.56%(149/1289)；夏季检出率最高为9.99%(210/2102)。HAdV合并感染检出率为2.85%(171/5998)，其中以HAdV与HRV的合并感染检出最多，占比16.96%(29/171)。共获得26条HAdV的Hexon/Penton base/Fiber基因序列，其中HAdV-B型17株(B3型13株、B21型4株)，HAdV-C型6株(C1型2株、C2型2株、C5型2株)，3株由HAdV-C1、HAdV-C2组成的重组病毒。结论HAdV是贵州省2024年儿童流感样病例的重要病原体之一。HAdV-B3为主要流行株，HAdV-B21、HAdV-C1、HAdV-C2、HAdV-C5以及重组株均为低水平流行。儿童流感样病例中存在与HAdV的合并感染，主要的合并感染病毒为HRV，托幼机构的人群聚集是导致HAdV感染的重要原因之一。
反向疫苗学在呼吸道合胞病毒疫苗研发中的应用
周振威;任思蕊;呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus, RSV）作为诱发免疫低下人群严重下呼吸道感染（Respiratory syncytial virus lower respiratory tract disease, RSV-LRTD）的主要病原体，其疫苗研发长期受困于抗原变异、免疫力不持久及缺乏理想动物模型等挑战。反向疫苗学（Reverse vaccinology, RV）通过整合基因组学、结构生物学和计算免疫学，实现了疫苗抗原的科学筛选与优化整合，显著推进了呼吸道合胞病毒疫苗从基础研究到临床应用的转化进程。本文系统综述了反向疫苗学在RSV疫苗领域的应用进展：早期锁定关键抗原F蛋白和G蛋白；中期解析并优化蛋白构象；近期预测并联合多表位设计得到广谱保护疫苗；未来，基于反向疫苗学的人工智能辅助抗原设计、通用多联疫苗开发及针对不同高危人群的免疫策略优化是RSV疫苗研发的重要方向。
猫白血病病毒的研究进展
庞帅赛;朱世强;刘光清;孟春春;猫白血病病毒（Feline leukemia virus, FeLV）是一种常见的对猫具有高度传染性的逆转录病毒，可以通过多种途径传播，在多猫环境中传播尤为迅速。FeLV具有较长的潜伏期，患猫可持续向周围环境排放病毒，目前尚无针对FeLV感染的特效治疗方法。本文就FeLV的结构、分类、分型、受体、致病机制及疫苗等方面的研究进展进行综述，以期为后续开展FeLV相关研究提供参考资料。